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利用CCK-8試劑盒試驗的兩種方法分享
更新時間:2019-04-14 點擊次數(shù):2546次
   利用CCK-8試劑盒試驗的兩種方法分享
  在細胞培養(yǎng)實驗過程中,大家是不是總會好奇別人家的實驗總是做的又快又好,而自己做的實驗又慢又難得做出自己滿意的結果,搞得一天到晚也挺忙的,心想:我也很努力很認真啊,為啥效率總提不起來呢?
  其實,有時候并不是自己不努力,只是沒有找對方法。做實驗可不能光是埋頭苦干,還要學會運用合適的檢測試劑盒,這樣就能事半功倍。
  如果你還在用MTT,那就真的OUT了,MTT花4小時才能得到的結果用CCK-8試劑盒只需1小時,CCK-8試劑盒可用于細胞增殖和毒性分析,同MTT法相比,CCK-8試劑盒即開即用,檢測時間大概在1小時左右。
  不僅如此,CCK-8試劑盒對細胞的毒性極小,*可以測完細胞增殖或藥物毒性后再繼續(xù)用細胞進行下游實驗。下面小編就來為大家介紹一下CCK-8試劑盒的具體情況。
  CCK-8試劑盒基本原理
  基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓*(1-MethoxyPMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產物(Formazandye)。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。
  CCK-8試劑盒產品用途
  主要用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。
  細胞毒性檢測的實驗對比
  CCK-8試劑盒的實驗方法與步驟
  ☆實驗一:細胞活性檢測
  1.收集對數(shù)期細胞,調整細胞懸液濃度,96孔板每孔加入100μL,使待測細胞調密度至(1,000~10,000)/孔。
  2.5%CO2,37℃培養(yǎng)細胞24小時(培養(yǎng)時間根據細胞種類的不同和每孔內細胞數(shù)量的多少而異)。
  3.每孔加入10μLCCK-8試劑盒溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200μL,則需加入20μLCCK-8試劑盒溶液,其它情況以此類推。
  4.在細胞培養(yǎng)箱內繼續(xù)孵育0.5~4小時,對于大多數(shù)情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定(一般情況下,白細胞較難顯色,因此需要較長的CCK-8試劑盒反應時間或增加細胞數(shù)量。懸浮細胞與貼壁細胞相比較難顯色。對于貼壁細胞,CCK-8試劑盒的培養(yǎng)時間一般為1~4小時,注意:CCK-8試劑盒的*反應時間以具體顯色的*時間為準)。初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測,然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。
  5.在450nm測定吸光度。
  ☆實驗二:細胞增殖-毒性檢測
  1.收集對數(shù)期細胞,調整細胞懸液濃度,96孔板每孔加入100μL,使待測細胞調密度至(1,000~10,000)/孔。
  2.5%CO2,37℃培養(yǎng)細胞24小時(培養(yǎng)時間根據細胞種類的不同和每孔內細胞數(shù)量的多少而異)。
  3.加入10μL不同濃度的待測物質,將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間(例如6、12、24或48小時)。
  4.每孔加入10μLCCK-8試劑盒溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200μL,則需加入20μLCCK-8試劑盒溶液,其它情況以此類推。
  5.在細胞培養(yǎng)箱內繼續(xù)孵育0.5~4小時,對于大多數(shù)情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定(一般情況下,白細胞較難顯色,因此需要較長的CCK-8試劑盒反應時間或增加細胞數(shù)量。懸浮細胞與貼壁細胞相比較難顯色。對于貼壁細胞,CCK-8試劑盒的培養(yǎng)時間一般為1~4小時,注意:CCK-8試劑盒的*反應時間以具體顯色的*時間為準)。初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測,然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。
  6.在450nm測定吸光度。

滬公網安備 31011802001678號

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