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CCK-8試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反響的完結(jié)需求有一定的溫度，這一保溫進(jìn)程稱(chēng)為溫育，有人稱(chēng)之為孵育，在本產(chǎn)品中似不恰當(dāng)。
保溫的方法除有的附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將其置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，本產(chǎn)品應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，終將ELISA板放在濕紗布上。
CCK-8試劑盒步驟：
1、從室溫平衡20分鐘后的鋁箔袋中取出所需酶標(biāo)板孔數(shù)目，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2、標(biāo)準(zhǔn)品和樣本加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL，空白孔不加。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3、加酶：標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。
5、配液：將20X濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍后備用。
6、洗滌：小心揭開(kāi)封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次。
7、顯色：每孔加入底物A、B各50μL，輕輕震蕩混勻后，37℃避光孵育15min。
8、終止：每孔加入終止液50μL，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立刻轉(zhuǎn)為黃色。
9、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，15分鐘內(nèi)在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度（OD值）。
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